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層析實驗冷柜廠家講解薄層層析定性與定量分析

 更新時間:2016-01-07    點擊量:4353
    薄層層析可以對物質(zhì)成分進行定性和定量測定。
 
定性分析——根據(jù)日光或紫外光,不同成分的不同顯色,判定物質(zhì)的組成成分。
 
定量分析——洗脫法測定成分含量或薄層掃描法測定含量。
 
一、薄層層析定性檢測
 
1)物理方法:主要紫外燈下檢測,利用物質(zhì)在254、365nm這兩個單色光下產(chǎn)生不同顏色不同強度熒光來檢測或利用在該光下不產(chǎn)生熒光而在熒光板上成為暗斑的方式檢測。
 
2)化學(xué)方法:主要指顯色劑顯色法:顯色劑分通用型和專屬型。通用型能廣泛的與不同類型化合物反應(yīng)。專屬型對某類化合物,共有某種功能基化合物起反應(yīng)。常見通用型顯色劑有碳化試劑(含不同濃度的酸)、磷鉬酸、三氯化銻、還有水。專屬型顯色劑,較多、復(fù)雜、具體物質(zhì)可照藥典操作及查閱有關(guān)文獻資料。
 
3)生物方式:將某些特定細菌的凝膠混懸液倒在展開后的薄層板上,用適當(dāng)溫度培養(yǎng)一段時間,以此檢測某些具有抑菌或殺菌的活性物質(zhì)。
 
二、薄層層析定量測定
 
1)斑點刮取定量:
 
刮取隨行對照品同位置供試品的斑點,用適當(dāng)溶媒提取后,用紫外分光法、氣相法、原子吸收分光光度等色譜手段測定。
 
2)直接定量:
 
a比斑點面積:用每格1mm2透明格紙蓋在薄層板上測量斑點所占面積mm2與對照品相互比較,定量誤差在10-20之間。
 
b薄層掃描法:實際工作原則是:用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長一定強度的光,照射在薄層板斑點上,進行掃描,用儀器測量通過斑點的光束強度的變化,從而達到定量的目的。
 
測定方式分類:反射法:測量反射光的強度。
 
透射法:測量透射光的強度。
 
掃描方式分類:單波長法、單光束法;單波長、雙光束法;雙波長法。
 
薄層掃描儀的組成:光源、單色器、薄層板臺架及驅(qū)動裝置、檢測器、數(shù)據(jù)處理儀。操作方法步驟有供試品前處理、點樣、展開、上機掃描、數(shù)據(jù)處理。

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