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實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)操作原理、步驟及適用范圍

 更新時(shí)間:2015-01-28    點(diǎn)擊量:2728
 一、實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)儀器設(shè)備
 
紫外檢測(cè)儀、蠕動(dòng)泵、記錄儀、ATK層析系統(tǒng)、層析柜、樹脂、樣品等。
 
二、實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)原理
 
由于填料的不同,各個(gè)實(shí)驗(yàn)室所使用的層析技術(shù)的原理也不*相同。但不外乎以下幾種基本原理:分子篩作用、離子交換作用、親和層析作用等等。分子篩作用是由于填料上有一定規(guī)格的孔徑,分子量大小不一樣的樣品流過柱子時(shí)所受到的作用力不一樣,所走的路徑也不同,所以流出柱子的時(shí)間也就有了差異,不同組分得以分開。離子交換是由于正負(fù)電荷的吸引而使樣品掛在填料上,改變?nèi)芤涵h(huán)境,使樣品分子所帶的電荷產(chǎn)生變化,從而被洗脫下來,不同組分與柱料的吸附作用力時(shí)不同的,從而洗脫條件也是不同的。親和層析就是柱料與被分離樣品特異性的吸附結(jié)合一起,從而使被分離物質(zhì)與其他成份分離開來。
 
三、實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)適用范圍
 
1、蛋白質(zhì)分子量的測(cè)定
 
2、蛋白質(zhì)的分離純化
 
3、多糖的分子量測(cè)定
 
4、多糖的分離純化
 
四、實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)操作步驟
 
1、柱料的前處理
 
2、選擇合適直徑與長(zhǎng)度的層析柱,裝柱
 
3、裝完柱之后就連上紫外檢測(cè)器,檢驗(yàn)260nm處的吸光值
 
4、用上樣緩沖液平衡柱子
 
5、將樣品液濃縮后上樣
 
6、洗脫液洗脫,部分收集器收集各個(gè)組分
 
7、分別測(cè)定各個(gè)組分的濃度和含量;合并活力峰
 
五、實(shí)驗(yàn)室層析技術(shù)注意事項(xiàng)
 
1、柱料前處理一定要*,*,將雜質(zhì)全部除去。
 
2、上樣之前柱子平衡要過夜。
 
3、分子篩層析時(shí)點(diǎn)樣量不能過大,柱面一定要平。
 
4、上樣、洗脫時(shí)一定要對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物跟蹤去向。
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